冷冻保护剂又是什么呢?它主要用于在低温保存生物样品过程中降低细胞的冷损伤。目前,常用的冷冻保护剂主要分为渗透性的低温保护剂和非渗透性的低温保护剂2大类。渗透性的低温保护剂是指在低温保护剂添加到细胞悬浮液后,可以渗透到细胞膜内部的来置换出细胞的水分。渗透性低温保护剂主要有甘油、DMSO、丙二醇、乙二醇等。非渗透性低温保护剂是指不能渗透到细胞膜内部。常见的非渗透性低温保护剂有海藻糖、葡聚糖等。此外近年来,也经常使用抗冻蛋白作为新型的低温保护剂。
步骤:(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、,逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞,用加的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
程序降温仪其主要功能是:可以根据各种被冻存样品不同的需求,选择一种适合的降温速度进行冷冻。从而使被冻样品的复苏成活率得到很大的提升。由于智能程序降温仪的使用很灵活简便,该仪器特别适用于:探索和优化各种被冻样品的冻存方案。上位机软件按照用户的编程,计算出当前的目标温度与实测温度的偏差值,用比例、微分、积分算法算出控制量。通过PDI输出电路去控制电磁阀的开关。当电磁阀开通时,液氮喷入冷冻室,风扇使液氮雾化并均匀地在箱内循环。改变电磁阀的开关频率,就控制了箱内的降温速度程控降温仪的产品特点分别是:微处理器控制,控制度高;温度范围:+50℃∽-180℃;粉末涂层的腔体结构,坚固耐用;原位发泡绝热设计,保温性能好,温度均一性高;不锈钢内壁,静音操作,运行安静;独立的样品 & 腔体温度探头,双探头控温,触摸屏同时显示;前部开门,方便样品的放入和取出,仪器自带至少6种常见程序,覆盖用户大部分用途; 至少20个自设定程序,可根据不同应用需求自行设定
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